一例黑颈天鹅疑似感染HHS的综合诊治

刘蕊，李富桂

（天津农学院 动物科学与动物医学学院，天津 300384）

摘要:本研究旨在通过对一例黑颈天鹅进行组织病理形态学观察及发病机理探讨，为黑颈天鹅的疾病防治提供参考。通过对送检的一例临床幼雏病死黑颈天鹅的固定组织进行组织病理学检查，综合问诊情况进行诊断。剖检和实验室检查结果表明：大体剖检可见典型的心包积液；肝脏色黄并伴有不同程度的坏死灶；脾脏有出血点；病理组织学检查可见肝脏水肿、肝细胞变性坏死、少量肝细胞内有核内嗜碱性包涵体；心肌纤维断裂、明显充血、可见单核细胞和淋巴细胞浸润。由于送检病料的局限性，导致后续的病毒分离鉴定未能进行，因此初步诊断为该黑颈天鹅疑似感染天津地区2016年7月新发疾病心包积水-肝炎综合征(Hydropericardium-hepatitis Syndrome，HHS)，并对其发病机理进行了探讨，对于疑似感染的地区采取预防措施。

关键词：黑颈天鹅；组织病理学检查；心包积液；嗜碱性核内包涵体；HHS

Pathological diagnosis of a suspected HHS in a black-necked swan

Rui Liu, Fugui Li*

(College of Animal Science and Veterinary Medicine, Tianjin Agricultural University,Tianjin,300384)

Abstract：The study aims to provide a reference for the prevention and treatment of black-necked swan by studying histopathological observation and pathogenesis of a black-necked swan.A comprehensive diagnosis was made by a method for the diagnosis, necropsy, gross lesion observation and histopathological examination of a black-swan swan in a zoo in Tianjin.The results of necropsy and laboratory testes was indicated that gross pericardial effusion can be seen in the general necropsy; the liver is yellow with varying degrees of necrosis; the spleen has bleeding points; Histopathological examination showed hepatic edema, hepatocyte degeneration and necrosis, and a small amount of intracellular basophilic inclusions in hepatocytes; myocardial fiber rupture, obvious hyperemia, visible monocyte and lymphocyte infiltration. The initial diagnosis was that the black-neck swan was suspected to be infected with the newly diagnosed hydropericardium-hepatitis Syndrome (HHS) in Tianjin in July 2016, and its pathogenesis was discussed. Take precautionary measures for areas suspected of being infected.

Key words:Black neck swan; Histopathological examination; Pericardial effusion; Basophilic nuclear inclusion body; HHS

组织病理学检查是兽医病理学常规的诊断方式，检查组织所发生的病变，探讨病变产生的原因、发病机理、病变的发生发展过程、最后做出病理诊断。此项技术已经广泛应用于临床工作和科学研究。心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium-hepatitis Syndrome，HHS)是由禽腺病毒血清4型（FAV-4）引起的一种禽类疾病，其名是对临床剖检特征的一种描述。该病主要多发于20至40日龄的肉鸡，发病迅速，发病后4-8天死亡率升高，并伴有大量心包积液，肝脏呈肿大变黄^［１］。该病首次发生于1987年的巴基斯坦安卡拉地区，又被称为安卡拉病^［2］。天津地区首次发现该病是于2016年7月，经过病毒的分离鉴定，确诊引起天津地区HHS的病原体为TJ1607毒株（GenBank登录号为：KY885021），TJ1607毒株与FAV-4的亲缘关系最近【王菁，2017,6】^［3］。HHS主要发生于3-5周龄的肉鸡，也可见于杂交鸡、麻鸡、种鸡和蛋鸡，肉鸭也可以发生^［4］。此次在黑颈天鹅身上发现疑似病，为除上述易感动物之外的首次报道，应引起畜牧业工作者的广泛重视。

1材料

1.1试验样品

 某动物园2018年2月1日送检的病死幼雏黑颈天鹅的固定组织（心脏、肝脏、肠道），病例号为180201。

1.2主要试剂

甲醛；酒精；二甲苯；苏木素；伊红

（1）Ehrlich氏苏木素染液的配制：秤量1 g苏木素溶于50 mL无水酒精，秤量7.5 g硫酸铝钾溶于50 mL蒸馏水，将两种溶液混合并加入50 mL甘油和50 mL冰醋酸，充分搅拌均匀后，置于阳光充足处，待4周后氧化成熟方可使用。

（2）1 %醇溶性伊红染液的配制：秤量1 g伊红粉末，加入100 mL 90%乙醇，用玻璃棒充分搅拌至完全溶解。

（3）1 %盐酸乙醇分化液的配制：量取1 mL浓盐酸，小心加入99 mL的无水乙醇中，混匀制成1 %盐酸酒精溶液。

 

2方法

2.1 问诊

发病日龄；发病时间；死亡时间；用药情况；饲养管理情况

病畜的精神状态；采食饮水情况；粪便状态；呼吸系统；羽毛状态；生长发育情况。

2.2 大体病变检查

询问剖检人员相关的大体病变检查结果。眼观肝脏、心脏、肠道等送检组织是否有明显的异常病变。

2.3 组织病理检查

将肝脏、心脏、肠道修整，随后进行冲水、脱水、透明、包埋、切片、HE染色、封片等处理，具体操作步骤如下^［5］。

（1）修块，固定24h之后的组织修成1cm*1cm*5mm大小的组织块，置于包埋盒中。

（2）水洗，流水冲洗包埋盒过夜，洗去渗入组织中的甲醛固定液，终止固定。

（3）脱水，将修整好的组织块在全自动半封闭脱水机中进行脱水。程序设置为70 %乙醇2 h，80 %乙醇2 h，90 %乙醇2 h，95 %乙醇Ⅰ1.5 h、95 %乙醇Ⅱ1.5 h，无水乙醇Ⅰ50 min、无水乙醇Ⅱ50 min。总脱水时间为10 h 40 min。

（4）透明，二甲苯Ⅰ，二甲苯Ⅱ各透明5 min。（观察透明程度，若组织完全透明则脱水完全，若组织周围出现白色雾状物质，则组织中的水份未被脱干净，应退回酒精中重新脱水，再透明。）

（5）浸蜡，蜡Ⅰ54 ℃，浸蜡时间为1h，蜡Ⅱ58 ℃，浸蜡时间为1h。

（6）包埋，切面向下，包埋蜡应与蜡Ⅱ一致，以保证组织块与石蜡融合完全。

（7）冷冻，冷冻台上冷冻数分钟，以保证石蜡凝固。

（8）切片，3 µm切片，切片前需修正蜡块，更新刀片，切片时均匀用力，左手持毛笔，右手转动切片机，切出连续条带。

（9）展片，采用温水漂浮法展片。将切好的蜡带放入47 ℃展片机的温水槽中，在表面张力的作用下将蜡带展开。

（10）烤片，烤片机上60 ℃烤45 min。

（11）HE染色，脱蜡：二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各5 min；水化：100 %乙醇、90 %乙醇、80 %乙醇、70 %乙醇依次各2 min，流水冲洗5 min；染色：苏木素染液10 min，流水冲洗30 s，1%盐酸酒精分化30 s，流水冲洗20 min，1 %伊红染色3 min，70 %乙醇、80 %乙醇、90 %乙醇、95 %乙醇、95 %乙醇各2 min，100 %乙醇、100 %乙醇各1 min，二甲苯Ⅰ、甲苯Ⅱ各5 min。

（12）封片，中性树胶封片。（滴适量树胶，用眼科镊夹住盖玻片一角，成45度角封片。）

（13）贴签镜检，使用显微镜，观察组织病理学变化。

 

3结果

3.1问诊结果

详细问诊结果见表1。

问诊项目	描述情况
发病日龄	幼雏
发病时间	2017.12.30
死亡时间	2018.2.1
用药情况	常规免疫，未有使用药物的情况
饲养管理情况	饲养密度适中，通风良好
精神状态	发病后精神沉郁，嗜睡
采食饮水情况	采食量和饮水量未见明显异常
粪便状态	黄色稀便样
呼吸系统	未见明显异常
羽毛状态	羽毛蓬乱，逆立，无光泽
生长发育情况	未见明显异常

表1 详细问诊结果

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3.2剖检结果

大体剖检结果见表2。

表2 大体剖检结果

脏器	眼观病变
鼻子周围	血性泡沫样液体
肝脏	肿胀，质脆，外观呈浅黄至深黄色，伴有不同程度的坏死灶
心脏	松弛柔软，心包内积有淡黄色渗出液
脾脏	出血点

 

 

 

 

 

 

 

3.3 病理检查结果

病变组织石蜡切片，HE染色观察发现：肝脏水肿，淤血明显且有少量出血（如图3-1），部分区域内见灶状炎细胞浸润，肝细胞变性坏死、并有少量嗜碱性核内包涵体（如图3-2）；心肌纤维断裂，充血明显，部分出血（如图3-3），肌细胞浊肿，可见单核细胞和淋巴细胞浸润（如图3-4）；肠道充血（如图3-5）。

 

图3-1（HE×40） 肝脏水肿，淤血               图3-2（HE×100）嗜碱性核内包

Fig. 3-1（HE×40） Liver edema,Congestion         Fig. 3-2（HE×100）Basophilic intranuclear 

inclusion bodies                                                                           

                                  

图3-3（HE×40）心肌纤维断裂                    图3-4（HE×100）单核细胞，淋巴

Fig .3-3（HE×40）Myocardial fiber rupture            Fig. 3-4（HE×100）Monocyte,Lymphocyte

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

图3-5（HE×40）充血

Fig.3-5（HE×40）Congestion

 

3.4 综合诊断结果

综合问诊结果，大体剖检结果和病理检查结果，该黑颈天鹅为心肌炎和肝炎症状，初步诊断为疑似HHS。

4讨论

心包积液-肝炎综合征（HHS）是以心包积液和包涵体肝炎为特征的一种高致病性传染病，首次发生于巴基斯坦安卡拉地区，中国于2013年首次报道出现此类病例^［6］。随后，我国的河南、山东、辽宁、吉林等相继报道出该地区的部分鸡群出现以心包积液和包涵体肝炎为特征的传染性疾病。经分离鉴定，引起上诉地区该病的病原体均为血清4 型 I 群禽腺病毒。该病多于20-30日龄开始发生死亡，28-35日龄为死亡高峰期，并持续4-8天，35-42日龄死亡数量减少，病程为8-15天^{［7］［8］}，其死亡率约为20%-75%，最高可达到80%^［9］。该病给我国养禽业造成了严重的经济损失，因此加强对该病的病理学研究，对于保护和促进我国养禽业的发展具有重要意义。天津地区于2016年7月首次发现该疾病，随后进行了该病的病毒分离鉴定、疾病模型构建、后续抗体研制和免疫保护实验，为天津地区的HHS防治提供了重要的参考。

此次病例诊断由于送检病料的局限性，导致后续的病毒分离鉴定未能进行，综合问诊情况、大体剖检状态和组织病理检查在一定程度上只能确诊疑似感染HHS，我们给予的建议是对环境进行消毒，注意病禽的隔离；全群提高免疫力、防止继发感染；减少应激；调理肝肾功能。此次病例问题的出现也为我们后续的病料采集和病理诊断敲醒了警钟。作为一名病理工作者，剖检的过程中一定要注意病料的采集与处理，全面考虑病例的可能性，不要只做单方面的诊断。据报道，HHS主要见于杂交鸡、麻鸡、种鸡、蛋鸡和肉鸭，此次诊断黑颈天鹅疑似感染该疾病为除上诉品种之外的首次报道，这在一定程度上扩大了HHS的感染范围。患病宿主范围的扩大，对于我们后续的动物保护试验有更加深远的意义。患病家禽主要表现为无明显临床症状而突然倒地死亡^［10］，造成HHS的前期诊断尤为困难，因此对于该病的预防成为养殖工作者的重中之重。后续对于HHS的免疫防治研究正在进行当中，此次病例的出现为研究HHS的致病机理和免疫防治提供了良好的疾病模型。

HHS的防治应采取预防为主，治疗为辅的综合防治措施。在预防中，以净化种源、饲养管理为重点。对于垂直传播性疫病的流行，物理性的生物安全措施并不能够阻断其对家禽的危害，崔治中（2013）表示控制疫病的最根本措施还需从种源的选择和净化着手，净化种源是实现家禽规模化养殖的核心措施^［11］。在水平传播方面，应从传染源、传播途径、易感动物三方面入手，切段其中任何一个环节均可有效的控制疾病的传播。FAV-4在鸡群中存在隐性感染，极易出现广泛的水平传播，适当横向通风，减少饲养密度，科学的饲养是管理的重点。

 

5参考文献

[1] Horst, L., Christopher, R., Roland, W., et al. 2013. Hydropericardium syndrome: current state and future developments. Archives of Virology, 158(5), 921.

[2] Zhao, J., Zhong, Q., Zhao, Y., et al. 2015. Pathogenicity and complete genome characterization of fowl adenoviruses isolated from chickens associated with inclusion body hepatitis and hydropericardium syndrome in china. Plos One, 10(7), e0133073.

[3] 王菁，张文生，刘蕊，李富桂.天津地区发生禽心包积液-肝炎综合征及其病毒分离鉴定［Ｊ］.中国兽医，2017，,53（3）:16-17

[4] Cook JK.Spread of an avian adenovirus(CELO Virus) to uninoculate fowl［Ｊ］.Research in veterinary science,1974.

[5] Litjens, G., Sánchez, C. I., Timofeeva, N., et al. 2016. Deep learning as a tool for increased accuracy and efficiency of histopathological diagnosis. Sci Rep, 6, 26286.

[6] 刁有祥. 2016. Ⅰ群禽腺病毒感染的流行情况与防控. 北方牧业(10), 21-21.

[7] 盖淑文. 2016. 肉鸡安卡拉病－心包积液肝炎综合征的诊治. 中国畜禽种业, 12(9), 154-154.

[8] 刘典佐. 2015. 心包积水-肝炎综合征的防治. 中国动物保健(10), 49-50.

[9] 邱翔，齐雪峰，杨晓燕．鸭 Ig G 纯化方法比较试验［J］．西南民族大学学报，

2004，30(3) :331 － 333.

[10] 袁万哲, 李玉保, 王建昌,等. 2016. 鸡心包积液-肝炎综合征的初步研究. 中国兽医科学(2), 157-160.

[11] 崔治中. 2013. 调整我国畜牧业布局 重建养殖业生物安全大环境. 兽医导刊(12), 8-8.

 

基金项目：天津市科技计划项目（项目编号:15ZXBFNC00210）

作者简介：刘  蕊(1995-)，女，天津农学院，硕士研究生在读。Email:m13331710020@163.com；Tel：13072206323

*通讯作者：李富桂，女，博士，教授，主要研究方向：动物疾病诊断与控制。Email:lifugui2008163@163.com