EV71型手足口病患儿外周血T淋巴细胞亚群测定的临床意义

黄循斌，符青松，陈柏良，谢晓彬，周曙明

(深圳市龙岗中心医院儿科，广东 深圳  518116)

摘 要: 目的  探讨EV71型手足口病(HFMD)患儿免疫功能的变化。方法  收集HFMD患儿138例，其中普通组83例、重症组55例。以70例正常儿童作为对照组。采用流式细胞术检测外周血T细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺百分数。重症组治疗5天后再检测上述指标，与治疗前进行比较。结果  重症组患儿的 CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺ /CD8⁺均较对照组下降，且重症组低于普通组，差异均有统计学意义(P均＜0.05)；重症组治疗后CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺与治疗前比较无明显差异，仅CD4⁺ /CD8⁺比值明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论  EV71型HFMD患儿存在细胞免疫功能紊乱。

关键词：肠道病毒71型；手足口病；淋巴细胞亚群；流式细胞术

Clinical significance on peripheral T lymphocyte subsets

in children with EV71 hand-foot-mouth disease  

Huang  Xunbin，Fu  Qingsong，Chen  Bailiang，Xie  Xiaobin，Zhou  Shuming

(Shenzhen Longgang Central Hospital of Pediatrics, Shenzhen , Guangdong, 518116)

Abstract: Objective  To approach the variance of cellular immunological function of hand-foot-mouth disease(HFMD) with enterovirus 71 (EV71) in children.  Methods  Collected 138 cases of HFMD, amongst which were ordinary group 83 cases and severe group 55 cases. Took 70 cases of healthy children as a control group. Used flow cytometry to detect the percentage of peripheral blood T cell subsets CD³⁺, CD⁴⁺and CD⁸⁺. Severe group had been detected the above indexes after 5 days treatment in order to compare with which before treatment. Results  The percentage of peripheral blood T cell subsets CD³⁺, CD⁴⁺, CD⁸⁺ and  CD⁴⁺ /CD⁸⁺ in severe group was lower than which of control group and ordinary group. The variance also had a statistical significance (P < 0.05).  Compared with which before treatment, the percentage of CD³⁺, CD⁴⁺ and CD⁸⁺ in severe group had no obvious variance after treatment, only the CD⁴⁺ /CD⁸⁺ ratio obtained a significant increase. The variance possessed a statistical significance(P < 0.05).  Conclusion  The cellular immune function disorder exists in children with type EV71 HFMD.    

KEY WORDS：EV71；HFMD；Lymphocyte subsets；Flow cytometry

手足口病(Hand, foot and mouth disease, HFMD)重症型多由肠道病毒71型(EV71)感染引起^［1］。EV71 具有高度嗜神经性，起病急、进展快，重症病例可并发脑膜炎、肺水肿、心肌炎、呼吸循环衰竭等严重并发症，其致残率和死亡率较高^［2］。迄今对EV71感染所致的重症型手足口病发病机制尚未阐明，越来越多的证据显示异常免疫反应扮演重要角色^［3-4］。本文通过对138例EV71型HFMD进行外周血T淋巴细胞亚群测定，探讨其变化在 EV71型HFMD发生发展中的作用以及与疾病严重程度的关系。

1  资料与方法

1.1  临床资料  

患儿均来自深圳市龙岗中心医院儿科2011年5月至2013年5月期间住院的HFMD患儿，均符合中华人民共和国卫生部颁发的《手足口病诊治指南（2010 年版）》诊断标准，咽拭子标本利用实时荧光PCR技术确定病原为EV71。 试验组138例患儿，根据诊断标准分为两组，其中83例患儿无合并症，作为普通组，男45例、女38例，平均年龄（2.3±1.5）岁；55例患儿经脑脊液检查，明确合并脑膜脑炎，作为重症组，男29例、女26例，平均年龄（2.8±1.2）岁；EV71型HFMD重症组按指南规范治疗5天后再检测上述相关指标，与治疗前进行比较。70例对照组为深圳市龙岗中心医院儿保科正常体检儿，男36例、女34例，平均年龄（1.6±0.7）岁。所有的受试对象在性别、年龄、体重上，差异均无统计学意义（χ²＝6.30，F＝2.50，P均＞0.05）。

1.2  方法  

采集EV71型HFMD组患儿入院时及重症组患儿经规范治疗症状好转时［一般为( 7±2) d］外周血2mL，置于EDTA-K2抗凝管，对照组于体检时抽取等量外周血，同法保存。采用美国ＢＤ公司的FACS Calibur 四色流式细胞仪检测，并用Simulset软件自动分析结果，分别得出外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+百分数及CD4⁺ /CD8⁺比值。

1.3  统计学处理  

    应用 SPSS17.0 统计软件包进行统计学分析，计量资料均符合正态性分布，以均数±标准差(±S)表示，多重组间比较采用最小显著检验法（LSD-t），两组间比较采用t检验。 检验水准α=0.05。

2  结果

2.1  外周血T细胞亚群的变化

    EV71型HFMD重症组T细胞亚群 CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺百分数均低于普通组和正常对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)；CD8⁺百分数在普通组和对照组比较，差异无统计学意义( P＞0. 05)；重症组CD4⁺/CD8⁺比值低于普通组及对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，普通组及对照组CD4⁺ /CD8⁺细胞比值的比较，差异无统计学意义( P＞0. 05) 。见表 1。

表1  外周血T细胞亚群检测结果比较（%,±S)

2.2   HFMD重症组治疗前后外周血T细胞亚群的变化

    HFMD重症组患儿治疗后CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺百分数虽有上升，但与治疗前比较无明显差异，组间比较差异均无统计学意义( P＞0. 05)；而CD4⁺/CD8⁺细胞的比值明显升高，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2  HFMD重症组治疗前后外周血T细胞亚群检测结果比较（%,±S)

3  讨论

Zhang^[5] 等研究提示婴幼儿感染EV71后易发展成重症病例。主要原因可能是婴幼儿免疫系统发育不健全，免疫功能不完善，成为病原体进攻机体的一个重要突破口且易引起机体免疫功能紊乱^[6]。淋巴细胞是机体免疫系统中最重要的细胞群，是反映机体免疫功能状态的重要指标^[7]。在免疫应答过程中，T淋巴细胞亚群 CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺ 的数量和CD4⁺ /CD8⁺ 比值的变化在免疫系统中占主导地位^[8]，CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺ 的数量下降则提示了机体免疫力功能的降低。CD4⁺/CD8⁺ 比值是人体免疫系统内环境的指标，比值下降提示机体免疫平衡状态失衡。本实验应用荧光标记流式细胞术，对EV71型HFMD患儿外周血淋巴细胞亚群进行分析，探讨其在判断EV71型HFMD的病情中的作用。

本研究显示EV71型HFMD重症组患儿外周血T细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺ 百分数及CD4⁺/CD8⁺ 比值均低于普通组和对照组，组间比较差异均有显著性的统计学意义。实验结果与张克昌^[9]等人研究结果相似；普通组患儿外周血T细胞亚群CD3⁺、CD4⁺百分数分别低于对照组，组间比较差异均有统计学意义；而CD8⁺ 百分数及CD4⁺/CD8⁺ 比值在普通组和对照组间差异无统计学意义。提示EV71型HFMD患儿普遍存在细胞免疫功能低下，抗病毒和清除病毒能力降低，重症病例患儿免疫平衡状态失衡，较普通型病例存在更显著的细胞免疫功能紊乱。本研究结果与曾慧慧等^[10]研究发现一致，均示病情越重，细胞免疫功能越低。其机制可能是HFMD患儿在急性感染了EV71后，人类主要组织相容性复合体(MHC-Ⅰ)类分子与CD8⁺ 分子结合，参与Ｔ淋巴细胞受体(TCR)/CD3介导的信号传导，启动MHC-Ⅰ类限制型Ｔ细胞应答，细胞毒Ｔ淋巴细胞(CD8⁺  + CTL)活性增加并识别和杀伤病毒感染细胞，在疾病早期即可出现数量下降，随着病情的进展，可引起CD8⁺ 杀伤Ｔ细胞的不断下降，不能有效的清除病毒感染的细胞，导致病情加重^[11-12]。

本研究还显示，HFMD重症组患儿经治疗后活化T细胞比例虽有上升，但与治疗前比较无明显差异；CD4⁺ /CD8⁺ 比值较治疗前显著升高。说明重症儿童体质较差、免疫系统恢复较慢，治疗后症状缓解时机体免疫平衡逐渐恢复。

综上所述， 在EV71型HFMD重症患儿中存在细胞免疫功能紊乱。早期监测HFMD 患儿CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺ 的数量和CD⁴⁺ /CD8⁺ 比值的动态变化，可作为判断疾病严重程度的临床参考指标。

参考文献

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