汕尾市吸毒者丙型肝炎病毒抗体高阳性率分析

吴超良

（汕尾市慢性病防治站检验科 广东汕尾 516600）

【摘要】目的 了解丙型肝炎病毒在广东省汕尾市吸毒人群中的传播疫情。方法 选择在汕尾市慢性病防治站门诊部接受药物治疗的吸毒人员1850例为调查对象，采用实验室诊断方法，门诊部注射室采集吸毒人员的静脉血，标本送回实验室离心取血清备用。试剂采用英科新创（厦门）科技有限公司生产的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）。阴性结果的病例6个月后再复检，试剂采用化学发光酶免疫分析法。结果 1850例吸毒者中丙型肝炎病毒抗体呈阳性者1751例，阳性率为94.65%，其中男性1532例，阳性1482例，阳性率96.74%（1482/1532）。女性318例，阳性269例，阳性率84.59%（269/318）。男女阳性率差异有统计学意义(χ²=8.72,P＜0.05)。结论 本地区吸毒人员的丙肝抗体阳性率高，提示丙型肝炎病毒感染率高，防控形势严峻。

【关键词】 吸毒者；共用针具；酶联免疫法；化学发光酶免疫分析法；丙型肝炎病毒抗体

    丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）引起的常见传染病，传染源主要是急性临床型和无症状的亚临床病人、病毒携带者^[1]。HCV主要经血源传播，给社会和家庭造成巨大的经济损失和公共卫生危害。值得重视的是，在我国大部分地区，静脉注射毒品的吸毒人群大部分感染了HCV，直接或间接共用污染的注射器具是吸毒人群感染HCV的主要危险因素^[2]。为了解广东省汕尾市吸毒人群的丙型肝炎流行情况，汕尾市慢性病防治站组织临床医生与实验室技术骨干合作科研项目，向汕尾市科技局申请科研课题，立项名称为《吸毒人群丙型肝炎检测与研究》（项目编号：2011C0024）。项目于2011年8月启动，至2018年1月，共采集1850例吸毒者的血清标本，检测项目包括HCV抗体、临床治疗期间肝功能的动态观察。现总结报告本研究中的丙型肝炎病毒抗体的检测情况。

1 资料与方法  

1.1 病例选择  为了落实《海洛因成瘾者社区药物维持治疗试点工作暂行方案》的文件精神，在管控吸毒人员的常规工作上增加艾滋病毒抗体检测、梅毒血清学检测、丙型肝炎病毒抗体检测、结核病筛查等实验室检验项目，旨在有效防止这几种重要传染病在吸毒人群中的传播。汕尾市范围内的高危人群包括吸毒、卖淫嫖娼者的健康体检项目集中在汕尾市慢性病防治站门诊部建档管理，并跟踪随访，重点强化疫情报告管理工作，提高报病准确性。广东省疾病预防与控制中心（CDC）多次考核我站的防控工作并给予肯定。我站借助现有的有利条件和实验室设备，选取 2011年8月至2018年1月在我站接受美沙酮药物治疗的吸毒者1850例为调查研究对象。其中男1532例，女318例。年龄21-51岁，吸毒时间1-19年。吸毒方式多采用静脉注射吸毒，多有共用针具史。门诊部的临床医生在完成对患者的入组登记、入组编号、入组咨询、常规体格检查后，开出化验单，并注明吸毒方式，录入计算机建立档案，然后带患者至门诊部注射室采集全血标本3-5mL,编号送检。采集标本由专职护士操作。

1.2 试剂选择  选用酶联免疫法（ELISA）。其检验原理是采用间接ELISA方法检测血清或血浆中丙型肝炎病毒（HCV）抗体。在微孔条上预包被基因工程表达HCV抗原，与血清中抗HCV抗体反应，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记抗人IgG的酶标记抗体与之结合，然后用“3，3'，5，5'-四甲基联苯胺”（TMB）系统显色。第3代试剂中包被抗原又增加了ns5蛋白，其敏感性和特异性得到进一步改善^[3]。ELISA 通常用于病原体及抗体的检测，如Ig、补体、肿瘤标志物等蛋白质的检测和非肽类激素、毒品的检测。目前临床上广泛应用的丙型肝炎病毒（HCV）感染诊断方法主要是检测患者血清HCV抗体，ELISA是临床进行HCV诊断的主要方法之一^[4]。初次检测HCV抗体呈阴性反应的病例复检时采用化学发光酶免疫分析法。

1.3 实验室检查  在实验室按常规处理吸毒者的静脉血，离心取血清备用。检验标本在实验室内部传递的过程属于检验前过程，此过程之所以是实验室质量保证体系中最重要、最关键的环节，是因为它是保证检验信息可靠、有效的先决条件。本站实验室已建立文件化的操作程序，并制定了适宜的室内质量控制和室间质量评估程序。确保标本合格，无溶血，无高血脂，无高胆红素。血清保存于冻存管中，置-70℃冰箱保存，7天内必须检测完毕。选用英科新创（厦门）有限公司生产的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)，整个实验过程严格按照要求操作。注意生物安全，使用生物安全柜、酶标仪、洗板机、去离子水。ELISA的测定步骤如下述。

（1）平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18℃-25℃），微孔板开封后，余者即时以自封袋封存。（2）配液： 浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和离子水按1:19稀释后使用。（3）编号：将微孔条固定于支架，按序编号，阴性对照和阳性对照各设2孔，1个空白对照孔。（4）稀释:每孔加入100µl样品稀释液。（5）加样：分别在相应孔中加入10μL阴阳性对照血清、10µL待测血清。（6）温育：覆上封板膜,置37℃温育60分钟。（7）洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30-60秒）。（8）加酶:分别在相应孔中加入酶标记抗体100μL。（9）温育：覆上封板膜,置37℃温育30分钟。（10）洗涤:洗涤液充分洗涤5次,洗涤后扣干(每次应保持30-60秒的浸泡时间）。（11）显色：每孔加底物A、B各50μL，轻拍混匀，37℃暗置30分钟。（12）终止：每孔加终止液50μL，混匀。（13）测定：用酶标仪单波长450nm测定各孔OD值，用空白对照孔调零，并记录结果。（14）临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照OD均值N×2.8，阴性对照OD均值小于0.05时以0.05计算。（15）结果判定：样品OD值S/ C.O.≥1为HCV抗体反应阳性，样品OD值S/ C.O.＜1者为HCV抗体反应阴性，阴性对照OD均值>0.08或阳性对照OD均值≤0.5时，实验无效，应重新实验。认真对待每一份标本，对可疑的标本要进行复查，不能确诊的要做丙型肝炎病毒核糖核酸（HCV-RNA）测定，以确保检验质量，杜绝假阳性结果^[5]。HCV-RNA在感染1周内即可被检测到，比抗体出现早数周时间，直观地反映了病毒的存在^[6]。呈阴性反应的病例经6个月后再取标本，采用化学发光酶免疫分析法按常规操作步骤进行实验。相较于ELISA法，化学发光酶免疫分析法对HCV抗体阳性检出率更高^[7]。

1.4  统计学处理  应用SPSS13.0统计软件进行统计学分析处理，采用χ²检验，取P＜0.05为有统计学差别意义。

2  结果  经实验室检测，1850例汕尾市吸毒人员丙型肝炎病毒抗体的阳性率相当高（94.65%），另外，经6个月的跟踪随访，再以化学发光酶免疫分析法检测99例首次检测时HCV抗体呈阴性反应的吸毒者血清，其结果是HCV抗体依然呈阴性反应。本次研究中，男性的HCV抗体阳性率高于女性，差异有统计学意义（χ²=8.72，P＜0.05），见表1 。

 表1             1850例吸毒者HCV抗体检测结果

3 讨论  有研究资料表明，丙型肝炎病毒(HCV)的膜蛋白的基因具有显著异源性和高度可变性而容易发生变异，并表现出HCV基因组各部位的变异程度不一致，其中3'NCR区变异程度较高，人感染HCV后所产生的保护性免疫力很差，能再次感染不同的亚型。由于丙肝病毒的基因序列存在很大的变异性，以至于目前尚无丙肝疫苗可以预防丙肝的发生，因此切断传染源是预防丙型肝炎病毒不断传播的主要手段^[8]。大多患者感染后容易慢性化肝损伤。HCV在患者肝细胞内复制引起细胞结构和功能改变或干扰肝细胞蛋白合成，可造成肝细胞变性坏死，表明HCV直接损害肝脏而致发病有相关性。多数学者也认为细胞免疫病理反应可能起重要作用，其受组织浸润细胞以CD3⁺为主,细胞毒T细胞特异攻击HCV感染的靶细胞而引起肝细胞损伤。临床资料指出部分受HCV感染的病人经长期的慢性肝炎后会导致肝硬化甚至肝细胞癌。肝硬化是人类主要致死疾病之一，我国肝硬化以乙肝肝硬化和丙肝肝硬化为主^[9]。人类是丙型肝炎病毒的易感人群，在受丙肝病毒感染后几乎都会产生HCV抗体，检测HCV抗体可以反映是否感染丙型肝炎病毒^[10]，阳性时提示受HCV感染。慢性丙肝患者也能够测到抗-HCV^[11]。目前临床对丙型肝炎的诊断仍是以临床症状结合抗-HCV、HCV-RNA等实验室指标为临床诊断依据^[12]。

  毒品是指鸦片、海洛因、冰毒、吗啡、大麻、可卡因以及国家规定管制的其它能够使人形成瘾癖的麻醉药品和精神药品。一段时期以来，在汕尾市流行的毒品以吗啡、海洛因、大麻、可卡因、冰毒为主。毒品能够使人产生精神依赖性，进入人体后作用于人的神经系统，使吸毒者出现强烈的渴求用药欲望，驱使吸毒者奋力寻求毒品供使用，这种精神依赖性难以消除，这是大多数吸毒者一而再、再而三复吸的主要原因，是国际医药界有待进一步研究解决方案的难题。吸毒严重危害家庭，导致很多家庭发生大悲剧。一旦家庭成员中有人吸毒，必然消耗大量经济供购买毒品，致使家徒四壁，久而久之必然走向贫困。吸毒者患病后还得找钱治疗，大大加重家庭负担，苦不堪言。吸毒严重危害社会，吸毒者丧失劳动能力，为了筹集毒资，在社会中靠拐骗、盗窃、抢夺甚至抢劫过日子。特别是吸毒者产生幻觉后行凶、驾车造成的恶性案件令人触目惊心。  

本次研究项目中发现吸毒者的丙肝病毒的感染率为94.65％，远远高于普通人群的丙肝病毒的感染率，是个严重的社会公共卫生问题，说明汕尾市吸毒人群的丙型肝炎传播疫情非常严峻。丙型肝炎是慢性疾病，发病时无临床症状，易被忽视。患者因缺乏对丙肝的传染途径、疾病过程、治疗及预后等知识的了解，一旦得知自己感染HCV,往往产生恐惧、忧虑等消极心理，为此，应向病人做好耐心的解释工作^[13]。吸毒人群不分男女，遍布人类社会的每个角落，是一个无法与社会隔离的群体，为了防止丙型肝炎病毒在社会中的失控，呼吁有关部门应加大力度宣传共用针具吸毒的危害性，引导他们主动加入到药物(美沙酮)的替代治疗中来。本次研究中，男性的HCV抗体阳性率高于女性，其原因有待进一步考究。美沙酮经我国临床药学研究机构研究证实，是治疗吗啡、海洛因成瘾者的有效药品，具有低毒性、低副作用、服用方便的优点，经国家有关部门批准应用于社区戒毒，证实是防止毒品泛滥的有效措施之一。同时强调推广使用安全套的重要性，避免在性接触中传播HCV。由于这类人群的婚姻状况不稳定，多数因吸毒导致离婚，以及同家人的沟通存在障碍等原因，因此无法召集他们的配偶前来同时检测相关项目，不能从中了解丙型肝炎病毒在性接触中的传播情况，实为本次研究的欠缺之处。根据《全国社区戒毒社区康复工作规划（2016-2020年）》的文件精神，做好社区戒毒社区康复工作，事关禁毒工作大局，事关社会和谐稳定，事关人民幸福安康。近年来，有关部门依照《禁毒法》和《戒毒条例》等法律法规，积极探索戒毒康复新模式，深入开展社区戒毒社区康复工作，在教育挽救吸毒人员、减少毒品社会危害方面取得了良好成效。但是，当前，我国毒品滥用现象持续存在，滥用合成毒品人数增长很快，戒毒人员复吸率高、戒断巩固难、融入社会难的问题仍较突出，戒毒康复工作任务十分繁重，严重影响公共安全和社会稳定。因此，大力加强社区戒毒社区康复工作，整合基层资源，依靠人民群众，帮助吸毒成瘾人员戒除毒瘾、融入社会，是减少毒品需求、巩固毒品治理成果的重要举措。为规范我市社区戒毒社区康复工作，有效帮助吸毒成瘾人员戒除毒瘾，回归社会，保护公民身心健康，维护社会秩序，根据《中华人民共和国禁毒法》、《戒毒条例》和《广东省公安厅、广东省禁毒办<关于加强社会戒毒社区康复处置执行工作的通知>》要求，结合我市实际，制定了《汕尾市社区戒毒社区康复工作程序规范》（试行），作为开展禁毒工作的行动指南。社区戒毒社区康复工作站建设情况良好，在陆丰市的甲子镇、甲西镇、甲东镇、东海镇、南唐镇、碣石镇、湖东镇、博美镇、金厢镇、潭西镇、陂洋镇、八万镇、内湖镇、城东镇、河东镇、大安镇、河西镇、上英镇、西南镇、桥冲镇、星都经济开发区、大安农场、铜锣湖农场的37个工作站已建成并启动使用。在各个工作站均配备政府统一购买的社工为之服务，包括定期尿检、心理辅导、贫困帮扶等人文关怀措施得以有效落实。

希望能借助本次研究所得出的数据，向社会各界特别是对吸毒者和有涉毒意向的年轻人敲响警钟：远离毒品，洁身自爱。

[参考文献]

[1] 童明庆.临床检验病原生物学[M].北京：高等教育出版社，2006：369.

[2]吴超良.611例吸毒者丙型肝炎病毒抗体检测结果分析[J].中国医药科学，2011,1(7):153-154.

[3]冯国钢.丙型肝炎病毒临床检验技术研究进展[J].齐齐哈尔医学院学报，2010,31（17）:2781-2782.

[4]张卓然，倪语星.临床微生物学和微生物检验[M].北京：人民卫生出版社，2004,385.

[5]于洋，周诚，祁自柏，等.丙型肝炎病毒抗体诊断试剂的质量检测[J].中国生物制品学杂志，2003,16（2）:108-109.

[6]杨瑞锋，魏来.乙型和丙型肝炎病毒核酸检测技术及进展[J].中华检验医学杂志，2010,33（5）:476-780.

[7]万东文.化学发光酶免疫分析法与酶联免疫吸附试验在丙型肝炎抗体检测中应用比较[J].现代医用影像学，2017,26（1）:193-194.

[8]谭英.丙肝病毒感染的危险因素及防治对策[J].当代医学，2015,21（4）:162.

[9]窦永青，郝彦琴，王勤英，等.病毒性肝炎患者继发肝硬化的危险因素分析[J].山西医科大学学报，2017,48（12）:1229-1232.

[10]姚光弼.临床肝病学[M].上海：上海科学技术出版社，2004:370.

[11]马文昭.丙型肝炎病毒抗体的检测及临床意义[J].中国现代医生，2008,46（13）:159-159.

[12]尹秀华.丙型肝炎检测方法的研究进展[J].医学理论与实践，2013,26（2）:171-173.

[13]何亮，李墨奇,丁灵莉.防止血液透析室丙肝病毒传播的体会[J].西部医学，2009,21（3）:365-365.