猪霉形体肺炎自家疫苗的制备

（博兴县畜牧兽医局  李润楠 18765435005）

前言

随着人们生活质量和需求的不断提高,养猪形式随市场行情也发生了相应变化,由原来千家万户分散饲养逐步向规模化、集约化乃至工厂化发展。但由于规模化猪场自繁自养的能力未完全达到,育肥用的大部分商品苗猪(生长肥育猪)仍来源于市场,导致猪场内猪霉形体病(猪气喘病)不断发生。猪霉形体病是一种高发病率，低死亡率的疾病。它是一种给养猪业带来巨大的影响，造成养猪业成本上升，利润下降的严重猪传染病。在我国，同为100kg的出栏猪，感染本病的猪比未感染的多损失11.9元。有关资料显示在美国每年因此损失达18亿美元。

霉形体的诊断是为了及早对病原做出判断以便早期采取防治措施，为临床诊断提供理论依据。自家疫苗是为了控制该病，在发病时进行紧急接种以最大程度地减少经济损失。本实验利用现有材料和技术制备了猪霉形体病自家灭活疫苗的油乳剂。为防治此病提供了一条廉价，易行的的途径。在节省成本的同时提高了治疗效果。

一、发病情况的调查

据了解，博兴县庞家镇某养猪场饲养的仔猪、母猪、架子猪共2250头于2017年10月17日猪突然发病。幼猪发病率高，并有个别猪死亡，症状也比较严重。全场共发病420头，发病率为18.7%。死亡55头，死亡率为2.4%。起初认为是感冒。肌肉注射安痛定、青霉素、链霉素、磺胺嘧啶连用3天，不见好转，反而有加重势头。

二、观察症状及病料的采集

眼观检查法:通过病理剖检,眼观检查仔猪肺、淋巴结、肝脏、肾脏、脾等器官的变化。组织学检查法:取病猪的肺、淋巴结、肝脏、肾脏、脾等组织,用10%福尔马林固定,常规石蜡切片,Ｈ.Ｅ染色后进行病理组织学检查。采集3只病猪的内脏：心、肝、肺、肾。然后用塑料袋装好，密封放入冰箱内保存用以制备疫苗。

三、病猪肺脏涂片检查

取病猪肺的肺炎病灶与健康肺组织交界处的切面,用清洁的玻片制成触片,自然干燥后,用甲醇固定２-５分钟,再用ｐＨ７.２的磷酸盐缓冲液稀释２０倍的姬姆萨氏染色液染色３小时,然后冲洗,干燥后,立即用丙酮浸洗１次,进行镜检。在触片中细支气管上皮细胞绒毛部位找到了猪霉性体病原,并且在靠近与支气管上皮连合处也找到猪霉性体病原。

四、自家灭活疫苗的制备

（一）抗原的制备  

将采取的内脏全部剪成细小的碎片放置于烧杯中，与一定量蒸馏水混合后，用多功能食物搅拌器充分的打碎，制成原液。将大块无菌纱布叠成16层，将原液过滤，得到约800ml液体。然后将此800ml液体分装后用电动离心机离心（4000r/min ,15min）。离心完毕后用滤纸过滤。然后再重复一次离心，过滤的操作，得到约700ml液体。取其中一小部分作接种使用。其余用1.5ml甲醛溶液灭活（福尔马林要逐渐滴加，并且要一边加入一边振荡），放入37℃恒温箱中保存24h，为保证灭活效果，期间需要每2h均匀振荡一次。在超净工作台中接种于培养基中，置于37℃恒温箱培养24h。制0.85%生理盐水2000ml分装于8个250ml小瓶中，高温蒸汽灭菌15min。将已灭活的培养物于超净工作台在培养基中划线，置于37℃恒温箱中培养24h后与前一步中所得进行对比，然后将两步进行细菌镜检观察灭活是否彻底。观察得到第第一步中有大量霉菌存在而已灭活的培养物中则无，则灭活彻底。

（二）佐剂

    本试验所用佐剂为司本—80，土温-80，硬脂酸铝。

（三）疫苗制备

按悬液：吐温-80=100：4的比例加入灭菌，吐温-80充分摇均直到吐温-80彻底溶解；水相的制备：将已制得的灭活悬液与灭菌生理盐水充分混合；油相的制备：取10号药用白油94份（以毫升为单位），加入硬脂酸铝2份（以克为单位），边加边搅拌，直到完全透明为止。再加入6份司本-80（以毫升为单位）。充分混匀后，高压蒸汽灭菌15min备用；乳化：先取6份油相放入胶体磨中，开动机器慢速搅拌，同时徐徐加入3份水相，加完后以8000—10000r/min；乳化3min，然后加入1份水相，继续搅拌30s，在终止搅拌前加入1%硫柳汞溶液，使其终浓度为万分之一。乳化成油包水型乳剂灭活苗。

（四）疫苗稳定性试验

将研制的油乳剂苗置37℃条件下，观察其变化。以3000ｒ/min离心15min观察其变化。

（五）粘稠度测定

     用1ｍｌ吸管(内径约为1 2ｍｍ)在25℃室温下吸满1ｍｌ疫苗,垂直放出。在8ｓ流出0.4ml以上适合于注射用。

（六）安全性检验

疫苗制备完成后选5头初生及断奶仔猪各注射5ml自家疫苗，另选5头断奶仔猪作为对照组,各注射5ml生理盐水.若注射后出现如呕吐等异常症状者，则该批疫苗不能使用。若进行了加被量注射后精神状态良好，食欲正常，无任何不良反映则该批疫苗可以使用。

（七）免疫效果测定

在免疫试验中,猪场定期消毒;参试母猪经严格的药物治疗后(经筛选用治喘灵或泰妙仙或喘气 100或息喘平连续用药2～3次症状消失后42ｄ再用1次),所产亲代乳仔猪随机分为免疫组及对照组。其中123头为免疫组36头为对照组。试验免疫40天，40天后早晨空腹称重。免疫于1周龄、3周龄各肌肉注射2ｍＬ/头灭活苗。试验前对试验组和对照组所有猪逐头驱虫、称重,隔离饲养,设专人负责管理并对圈舍彻底消毒,各组猪饲料和饲养条件一致。免疫注射后试验组和对照组均按相同的基础日粮饲喂，基础日粮的饲料组成为玉米、大米、稻谷、三等粉、棉饼、麦麸、三七糠贝壳粉、骨粉、食盐。;试验结束后对参试猪进行逐头称重,两组随机各选择3头屠宰，检查肺的病理变化。

（八）结果与分析

123头仔猪经用猪霉形体肺炎灭活苗二免后,未见临床表现。至试验结束无临床症状,屠宰肺部无变化,终生免疫保护率100%。在相同饲养水平下，免疫后40天后开始增重，全期饲料消耗，免疫组没增重1kg对照少耗饲料12.6%。对照组猪气喘明显,屠宰查肺心尖、膈叶均见肉变区。

（九）讨论与小结

本试验所制备的自家疫苗对猪厂的血清型较强的针对性,因此能有效的控制疫情减少经济损失,取得了较好的效果。但其局限性在于由于此疫苗只对本地猪厂有较强的针对性,对其他猪厂的针对性不强。因而所取得的效果有限。