阴道微生物芯片检测技术在阴道分泌物念珠菌检测中的

优势分析

陈雷鸣¹，陈艺升^2,，应春妹^△

（复旦大学附属妇产科医院检验科，上海200011）

^△ 通信作者，E-mail：ycmzh2012@163.com

摘要：目的 分析研究阴道微生物（BD Affirm VP Ⅲ）芯片检测技术在阴道分泌物念珠菌检测中的应用优势。方法 2017年12月-2018年7月于复旦大学附属妇产科医院就诊疑似念珠菌性阴道炎患者233例的阴道分泌物，分别采用10%KOH常规湿片镜检、真菌显色培养和阴道微生物（BD Affirm VP Ⅲ）试剂盒进行检测。对检测数据用SPSS20.0软件进行统计学分析。结果 以显色培养为金标准，常规镜检法和BD Affirm VP Ⅲ芯片检测念珠菌的Kappa值分别为0.42和0.82。镜检法与金标准念珠菌培养法的符合率为68.9%,假阴性率为53.9%，敏感性46.1%；BD Affirm VP Ⅲ芯片检测技术对念珠菌的检出结果与培养结果符合率为90.7%,假阴性率为16.4%，敏感性和特异性分别为83.6%和100%。结论 阴道微生物（BD Affirm VP Ⅲ）芯片检测技术操作方便，提高了阴道分泌物念珠菌的检出效率，有较高的准确性，对于临床及时准确诊断念珠菌性阴道炎具有较高的应用价值。

关键词: 阴道分泌物；念珠菌检测；念珠菌性阴道炎；BD Affirm VP Ⅲ芯片检测技术

Advantage analysis vaginal microbial chip detection technique

 in detection of vaginal secretion Candida

CHEN Leiming¹，CHEN Yisheng²，YING Chunmei^△

（Department of Laboratory,Obstetrics and Gynecology Hospital of Fudan University,Shanhai,200011,China）

Abstract: Objective Analyze the application advantages of vaginal microbe (BD Affirm VP III) chip detection technology in the detection of vaginal secretion Candida. Methods 233 cases of vaginal secretions from our hospital from December 2017 to July 2018 were examined by routine microscopy, fungal culture and vaginal microbial (BD Affirm VP III).The results were analyzed statistically by SPSS20.0 software. Results Using fungal culture as the gold standard, the Kappa values of Candida were 0.42 and 0.82, by microscopy and BD Affirm VP III. The coincidence rate between microscopic examination and gold standard Candida culture method was 68.9%, the false negative rate was 53.9%, and the sensitivity was 46.1%. The coincidence rate of BD Affirm VP III chip detection technology on Candida was 90.7%, the false negative rate was 16.4%, and the sensitivity and specificity were 83.6% and 100%.Conclusion The vaginal microbial (BD Affirm VP III) chip detection technology is easy to operate, improve the detection efficiency of vaginal secretions of Candida, and has high accuracy. It has high application value for timely and accurate diagnosis of candida vaginitis.

Key words: Vaginal secretion; Candida test; Candida vaginitis; BD Affirm VP III Chip detection technology

阴道炎是临床妇科的常见病、多发病。每年造成的就诊超过1000万人次^[1]。阴道炎主要分为细菌性阴道炎（BV）、真菌性阴道炎（念珠菌）和滴虫性阴道炎（阴道毛滴虫）。研究表明由念珠菌引起的阴道炎占20%-45%^[2，3]。所有成年女性中，约75%在其一生中会经历一次真菌性阴道炎，其中40%-50%还会经历第二次，约5%会复发，通常为顽固性真菌感染^[4]。早期正确诊断和及时有效地治疗对控制念珠菌性阴道炎具有重要意义。

念珠菌性阴道炎的诊断以临床症状和体征为基础，并经实验室检查证实。目前，临床常规实验室检查念珠菌性阴道炎主要通过阴道分泌物湿片镜检和真菌（念珠菌）显色培养两种方式。前者成本低、操作简单、但易受检测者经验、涂片制作质量等因素影响，且敏感性较低，容易造成假阴性而漏诊。真菌培养敏感性和特异性均较高，且对念珠菌可进行定量、定性检测，但价格高，操作繁琐，耗时长，常需要5天左右才能出具完整报告。为满足临床工作的实际需求，亟待研发快速、有效、准确性高的检测方法用于阴道念珠菌病的诊断。阴道微生物（BD Affirm VP Ⅲ）芯片检测技术以核酸杂交原理为基础，捕获念珠菌属独特的基因序列。具有灵敏度高，特异性好，操作简便等特点。本研究拟比较阴道分泌物涂片镜检、念珠菌显色培养和阴道微生物（BD Affirm VP Ⅲ）芯片检测3种方法，以探索简便、快速、高效的检测方法，为提高阴道念珠菌病的实验诊断水平提供依据。

1资料与方法

1.1研究对象 收集2017年12月-2018年7月在复旦大学附属妇产科医院门诊就诊阴道炎患者233例，用无菌拭子采集患者阴道后穹隆分泌物。

1.2试剂 10%KOH溶液自配；酵母菌鉴定培养基购自梅里埃（上海）生物制品有限公司；阴道微生物（BD Affirm VP Ⅲ）检测试剂盒购自美国BD公司。

1.3方法

1.3.1 常规镜检法 按照《全国临床检验操作规程（第4版）》的规范要求，将阴道分泌物采用生理盐水涂片法显微镜下进行常规检查，滴加1滴10%的KOH溶液混合后镜检，以提高阳性率，发现卵圆形真菌孢子、芽生孢子及假菌丝，判读为阳性；观察无真菌孢子或假菌丝，则判读为阴性^[5]。

1.3.2 真菌显色培养法 按照《全国临床检验操作规程（第4版）》的规范要求，将阴道分泌物接种于酵母菌鉴定培养基上，35℃培养24-48小时，根据颜色变化判定结果^[5]。

1.3.3 阴道微生态检测 按照阴道微生物（BD Affirm VP Ⅲ）检测试剂盒使用说明书的检验方法进行操作和结果的判读。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0软件进行统计分析，计数资料采用Kappa检验，计算Kappa值。Kappa值≥0.75，说明一致性较好；Kappa值<0.40,说明一致性程度不够理想；Kappa值在0.40～0.74说明一致性在可接受范围内。

2 结果

2.1显色培养、镜检法和BD Affirm VP Ⅲ芯片方法对检测念珠菌的结果比较，阳性标本检出率分别为55.8%、25.8%、46.8%，见(表1)。以显色培养结果为金标准，Kappa值分别为0.42和0.82，见（表2）

表1   3种检测方法结果

表2 镜检和BD Affirm VP Ⅲ与培养念珠菌检测结果比较

2.2 3种检测方法的操作性评价 各种检测方法的操作性要求，见（表3）。结果显示：10%KOH镜检操作时间最短，BD Affirm VP Ⅲ专业技能要求不高，同时可操作性强。但费用成本相对较高。

表3  3种检测方法的操作性评价

3 讨论

临床上由真菌引起的阴道炎称为念珠菌性阴道炎或真菌性阴道炎，已成为引起阴道感染的第二大病因^[6]。及时、高效的实验室诊断，有利于抗真菌治疗措施的实施。

显微镜镜检是常规检测念珠菌最直观的方法。近年来，随着抗真菌药物的过度使用，耐药菌株的出现，镜下观察孢子结构常不典型，鉴别诊断比较困难，易造成漏检。而热带念珠菌、光滑念珠菌和克柔念珠菌等不生长菌丝的念珠菌，镜检漏检率更高^[7]，延误诊断治疗。真菌显色培养法是检测念珠菌的金标准，不同的真菌菌落可以呈现出不同颜色和形态，并且可以做鉴定和药敏实验，指导临床治疗，避免耐药菌株的出现，尤其针对顽固性、复发性念珠菌感染治疗更为有效。但是一般需要4至5天才可出具完整报告，不利于早期诊断和治疗。阴道微生物（BD Affirm VP Ⅲ）检测以核酸杂交原理为基础，对念珠菌使用与其独特的基因序列互补的两个不同的单链核酸探针（捕获探针和显色探针）。念珠菌特定核酸分析物与探针分析卡中微球上的捕获探针发生杂交，再与显色探针发生杂交，酶标记物与捕获的分析物结合，通过显色反应判读结果。该方法简便、快速、灵敏度高、特异性好。

本研究分析了显微镜镜检、显色培养及BD Affirm VP结果显示镜检与金标准念珠菌培养法的符合率为68.9%,假阴性率为53.9%，敏感性46.1%,敏感性较低。BD Affirm VP Ⅲ芯片检测技术对念珠菌的检出结果与培养结果符合率为90.7%,假阴性率为16.4%，结果一致性较高，敏感性和特异性分别为83.6%和100%。有研究表明，阴道微生物检测试剂盒检出念珠菌属的灵敏度、特异性和准确度可达到82.3%、98.4%和95.2%^[8]。

念珠菌为条件致病菌，文献报道约15%女性阴道中存在念珠菌，一般情况下无临床症状不需要治疗^[9]。但当女性机体免疫力减弱，念珠菌繁殖到一定数目，可引起真菌性阴道炎^[10]。有症状的患者浓度≥10⁴CFU/mL^[11]，念珠菌培养为阳性。阴道微生物检测试剂盒对于念珠菌属菌落分析灵敏度在每次检测的对数期内为1×10⁴CFU/mL^[12]，因此BD Affirm VP Ⅲ芯片检测技术可以避免念珠菌培养阳性而造成的念珠菌性阴道炎的假阳性结果。由此，表2中显色培养阳性，而BD Affirm VP Ⅲ检测为阴性的21例标本既是上述原因造成。

镜检法虽然操作简单、方便快捷，但是由于阴道分泌物标本中各种细胞干扰成分较多，受检验人员专业素质、人力、环境等主客观因素影响较大，易造成漏检和误检，比较适合大规模筛查。真菌培养法阳性率和准确度高，但是其缺点是操作繁琐，耗时长。阴道微生物（BD Affirm VP Ⅲ）检测通过特异性基因序列检测原理，大大提高了检出率和准确性，与传统的PCR检测方法相比其检测时长仅为1小时，极大地提高了检测效率，缩短诊断周期，突破了传统检测法的局限性。同时，BD Affirm VP Ⅲ芯片检测技术还可以同时检测阴道毛滴虫和阴道加德纳菌，有助于三种常见阴道炎的临床检测诊断。

随着女性生殖道感染率日趋增高，传统检测技术已经无法满足临床需要，BD Affirm VP Ⅲ芯片检测技术对于临床诊断起到突破和创新作用，有助于念珠菌性阴道炎早期诊断、早期干预，具有很高的实用价值。

参考文献

[1]刘小琦,杜琼,刘祥琴.阴道分泌物念珠菌感染检测方法对比分析[J].重庆医学,2017,46(35):4927-4929.

[2]Hainer BL,Gibson MV.Vaginitis[J].Am Fam Physician,2011,83(7):807-815.

[3]Quan M.Vaginitis:diagnosis and managerment[J].Postgrad Med,2010,122(6):117-127.

[4]代倩苓,王薇.复发性念珠菌性阴道炎患者雌激素和孕激素水平变化测定及其临床意义[J].海南医学院学报，2014,20(2):229-230.

[5]尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第4版.人民卫生出版社，2015.

[6]毕红琳,徐升强.医院念珠菌感染的流行病学调查[J].数理医药学杂志,2011,24(2):203-204.

[7]史从宁,王雅杰,赵运转等.基因芯片技术在阴道分泌物常规检测中的应用研究[J].中国全科医学,2014,15:1776-1777,1783.

[8]Cartwright,C.P.Lembke,B.D.Ramachandran,K.Comparison of ncleic acid amplification assays with BD affirm VPⅢ for diagnosis of vaginitis in symptomatic women[J].Journal of Clinical Microbiology,2013,11:3694-3699.

[9]杨柳,李鹏宇,王智.真菌性阴道炎患者的假丝酵母菌感染及耐药性研究[J].检验医学与临床,2015,12(12):1730-1732.

[10]李金凤.2178例女性阴道分泌物检测结果的临床分析[J].国际检验医学杂志,2017,38(14):1993-1995.

[11]魏冰,陆庭嫣,沈俐等.BD Affirm VPⅢ芯片检测技术在阴道分泌物常规检测中的应用[J].检验医学，2017,32(12):1134-1136.

[12]Perikkos G Makrilakis K Pappas S.Affirm VPⅢ in the detection and identification of Candida species in vaginitis.International journal of gynecology and obstetrics:the official organ of the International Federation of Gynaecology and Obstetrics.2007,1:39-40.