北京地区老年人外周血淋巴细胞亚群正常参考范围的建立及比较

李恺¹，李青霖²，吴亮亮³，王小丹¹

¹解放军总医院南楼临床部保健科，国家老年疾病临床医学研究中心，100853，北京

²解放军总医院重症医学科，100853，北京

³解放军总医院肿瘤内科实验室， 100853，北京

摘要：目的  建立及比较北京地区老年人外周血淋巴细胞亚群正常参考范围。方法  将参与健康体检的524例北京地区健康成人按年龄段分为三组，采用美国Beckman流式细胞仪结合血液分析仪分别检测他们的外周血CD4⁺、CD3⁺及CD8⁺等T淋巴亚群及CD19⁺及NK细胞，使用SPSS17.0来分别比较各组间各项指标的统计学差异，并采用受检人群中年龄≥60岁的老年人的检测结果来获得适用于北京地区老年人的淋巴细胞亚群正常参考范围。结果  淋巴细胞百分比随年龄的增长有所降低；CD3⁺、CD3⁺CD8⁺及CD4⁺45RO⁺%均随着年龄的增大而增高； NK%均随着年龄的增大而降低。北京地区老年人外周血淋巴细胞亚群正常参考范围（以95%置信区间表示）如下：淋巴细胞：759～2783cell/μl（12.9～47.3%）；CD3⁺：929～1610cell/μl（53.08～91.92%）；CD3⁺CD8⁺：202～775cell/μl（11.53～44.25%）；CD3⁺CD4⁺：250～1248cell/μl（14.3～71.30%）；CD4⁺45RA⁺：33～662cell/μl（1.9～37.80%）；CD4+45RO⁺：199～807cell/μl（11.34～46.07%）；CD19：7～403cell/μl（0.4～22.99 %）；NK：32～501cell/μl（1.8～28.61%）。结论  年龄因素可影响人外周血淋巴细胞亚群，有必要建立适当的、适用于北京地区老年人的淋巴细胞亚群正常参考范围。

关键词：淋巴细胞亚群；参考范围；流式细胞仪；老年人

Establishment and comparison of reference ranges of peripheral blood lymphocyte subsets in healthy elderly people in Beijing area

LI Kai¹, LI Qinglin², WU Liangliang³, WANG Xiaodan¹

¹ Department of Health Care, South Building, Chinese PLA General Hospital, National Clinical Research Center for Geriatric Diseases, Beijing 100853, China

² Department of Critical Care Medicine, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China

³Laboratory of Oncology Medicine, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China

Corresponding author: Wang Xiaodan, Email: xdwang111@hotmail.com 

Fund program: National Science Foundation of China (81370452)

Abstract: Objective  To establish and comparison of the reference range of peripheral blood lymphocyte subsets in healthy elderly people in Beijing area. Methods  524 healthy adults who participated in the health examination were divided into three groups according to age group. Their peripheral blood CD4+, CD3+ and CD8+ T lymphoid subgroups and CD19+ and NK cells were detected by American Beckman flow cytometry and hematology analyzer. SPSS17.0 was used to compare the statistical differences between the various indexes of each group. The reference range of lymphocyte subsets suitable for healthy elderly people in Beijing was obtained from the test results of elderly people over 60 years of age. Results  The percentage of total lymphocytes have decreased with age; CD3⁺%, CD3⁺CD8⁺% and CD4⁺45RO⁺% all have increased with age; NK% have decreased with the increase of age. The reference range of peripheral blood lymphocyte subsets of healthy elderly people in Beijing (expressed in 95% confidence interval) is as follows: lymphocytes: 759～2783cell/μl（12.9～47.3%）；CD3⁺：929～1610cell/μl（53.08～91.92%）；CD3⁺CD8⁺：202～775cell/μl（11.53～44.25%）；CD3⁺CD4⁺：250～1248cell/μl（14.3～71.30%）；CD4⁺45RA⁺：33～662cell/μl（1.9～37.80%）；CD4+45RO⁺：199～807cell/μl（11.34～46.07%）；CD19：7～403cell/μl（0.4～22.99 %）；NK：32～501cell/μl（1.8～28.61%）. Conclusion  Age can affect peripheral blood lymphocyte subsets. It is necessary to establish suitable reference ranges for lymphocyte subsets suitable for health elderly person in Beijing area.

Key words: lymphocyte subsets; reference range; flow cytometry; elderly person

T淋巴细胞是高度异质性的细胞群体，根据T淋巴细胞表面分化抗原将成熟T细胞分为CD3⁺，CD4⁺ 和 CD8⁺三大亚群等，淋巴细胞亚群数量的变化不仅可以反映机体的免疫状况，还可以预示一些疾病进展的快慢，判断药物疗效，因而测定淋巴细胞亚群的变化，对于临床诊断免疫缺陷病、自身免疫性病及指导免疫治疗具有重要的临床价值。而老年人免疫器官的变化以胸腺最为明显，胸腺的上皮细胞的活性呈增龄性降低，造成由它合成的免疫活性物质-胸腺素的量降低，其结果是影响了对T细胞的“培育”，使得在机体免疫中起重要作用的T细胞的数量减少，同时失去了对B细胞的控制，致使B细胞对免疫活性物质的分泌失控。这些都导致老年人群中的免疫检测指标与成年人存在着一定的差异，本文旨在比较北京市健康成人不同年龄组间淋巴细胞亚群数量的差异，同时建立老年人外周血淋巴细胞亚群参考范围，以更好地为本地区临床诊断和治疗提供参考。

资料与方法

1.研究对象  健康体检者共525例，无免疫系统疾病、血液系统疾病、无病毒性或细菌性感染和过敏现症，肝、肾功能正常，血细胞计数正常，无长期使用免疫增强或免疫抑制药物，无有毒性化学物质接触史。其中男性302例、女性223例，年龄范围为47岁—96岁，平均年龄为72岁，年龄≥60岁的有439例，将这些健康体检者按年龄大小分为组1（年龄＜60岁）、组2（年龄60-70岁）、组3（年龄70-80岁）和组4（年龄＞80岁）的四组来进行比较。

2.样本采集  EDTA-K₂真空采血管采集静脉血2ml。

3.淋巴细胞亚群检测  与我院肿瘤内科实验室合作，采用双色流式细胞术检测淋巴细胞亚群：CD3⁺（总T淋巴细胞）、CD3⁺CD8⁺（T抑制/细胞毒细胞）、CD3⁺CD4⁺（T辅助/诱导细胞）、CD4⁺45RA⁺（T抑制细胞诱导亚群）、CD4⁺45RO⁺（T辅助细胞诱导亚群）、CD19⁺（总B细胞）和NK（自然杀伤细胞）。流式细胞仪为美国Beckman coulter，型号为FC500 MPL，检测试剂也均为Beckman。分析各亚群细胞占淋巴细胞的百分率。

4.白细胞计数  Coulter-JT血球计数仪检测白细胞数和淋巴细胞的百分率。

5.统计学分析  数据以`x±s表示，两组间比较用t检验，用百分位数法（95%可信限）获得60周岁以上老年人淋巴细胞亚群参考值范围。所有数据均使用SPSS17.0软件进行统计学分析。

结  果

1.4组健康成人T淋巴细胞亚群检测结果

将全体受测对象按照年龄分为4组，比较各组之间的差异（见表1）

2.4组各项指标的统计学比较结果

分别将组1与组2，组2与组3，组3与组4，组1与组3，组1与组4，组2与组4，中各项指标进行统计学比较（见表1-1、表1-2、表1-3、表1-4、表1-5、表1-6），结果显示淋巴细胞百分比随年龄的增长有所降低（表1-2、1-4、1-5、1-6中p值均＜0.001，表1-3中p值0.038）；CD3⁺亚群占淋巴细胞百分比在组1与组4之间存在统计学差异，随着年龄的增大而增高（p=0.027）； CD3⁺CD8⁺亚群占淋巴细胞百分比在组1与组4之间存在统计学差异，随着年龄的增大而增高（p=0.046）；NK细胞占淋巴细胞百分比在组1与组4之间存在统计学差异，随着年龄增大而降低（p=0.049）； CD4+45RO⁺亚群占淋巴细胞百分比在组1与组4之间存在统计学差异，随着年龄的增大而增高（p=0.019）；其余各项指标的组间差异均无统计学意义（P﹥0.05）。

表1-2：组2与组3淋巴细胞亚群统计学比较
	60＜组2≤70	70＜组3≤80	P值
WBC总数（cell/μl）	5714±1305	5821±1353	0.500
淋巴细胞（%）	33.3±7.5	29.4±8.4	＜0.001
CD3+（%）	71.1±9.6	71.4±10.4	0.568
CD3+CD8+（%）	27.2±9.1	27.8±6.4	0.312
CD3+CD4+（%）	40.2±10.6	41.1±11.1	0.491
CD4+/CD8+	1.6±0.8	1.7±0.7	0.633
CD4+45RA+（%）	16.2±8.9	15.8±8.7	0.695
CD4+45RO+（%）	27.9±8.7	28.3±8.6	0.722
CD19+（%）	10.1±7.5	9.9±7.0	0.453
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