五味沙棘泡腾片的提取工艺考察

杨静,阿古拉^＊

（内蒙古医科大学 药学院，内蒙古 呼和浩特，010100）

摘要:[目的] 研究五味沙棘泡腾片中沙棘膏、白葡萄干、甘草、栀子的最佳提取工艺.[方法] 采用Agilent C₁₈ 色谱柱(250mm×4.6mm,5μm;流动相为甲醇：0.4%磷酸水溶液（65:35），流速1ml·min^-1，柱温35℃，检测波长370nm，进样10μl；综合以槲皮素、山柰素、异鼠李素的总量为指标选取最佳工艺；采用L₉（3⁴）正交实验法，优取醇提法的最佳提取方法。[结果]优选出最佳提取工艺：75%乙醇，物料比为1：8，提取1h，提取2次。槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量分别是0.427mg/g、0.370mg/g、6.110mg/g。[结论]确定五味沙棘泡腾片中沙棘膏、白葡萄干、甘草、栀子的最佳提取工艺，为泡腾片剂研究和质量控制提供依据。

关键词：五味沙棘泡腾片；槲皮素；山柰素；异鼠李素；正交实验法

The study on extraction process of Wuwei Seabuckthorn effervescent tablets

Yangjing,A gula^＊

(College of Medicine,Inner Mongolia Medical University,Huhhot 010100,China)

Abstract: Objective To study the best extraction process ofshaji ointment, white raisin, Glycyrrhiza uralensis Fisch and Gardenia jasminoides Ellisin Wuwei Seabuckthorn Effervescent Tablets. Method  Agilent C₁₈ column (250mm × 4.6mm, 5μm)was used as analytical column with methanol- 0.4% phosphoric acid aqueous solution (65:35)as mobile phase.The flow rate was 1ml·min^-1, the column temperature was 35℃ and the detection wavelength was 370nm, the injection was 10μl; The comprehensive selection of quercetin, kaempferide, isorhamnetin as the index to select the best process; Using L₉ (3⁴) orthogonal experiment method, the best extraction method of alcohol extraction method is preferred. Results The optimal extraction process is preferred: 75% ethanol, material ratio is 1:7, extract 1h, extract 2 times. The contents of quercetin, kaempferol and isorhamnetin are respectively 0.427mg/g、0.370mg/g、6.110mg/g. Conclusion  The most common of shaji ointment, white raisin, Glycyrrhiza uralensis Fisch and Gardenia jasminoides Ellis in Wuxing Seabuckthorn Effervescent Tablets .The excellent extraction process provides the basis for effervescent tablet research and quality control.

Key words: Wuwei Seabuckthorn Effervescent Tablets; Quercetin; Kaempferide; Isorhamnetin; Orthogonal experiment

 五味沙棘方是蒙藏医临床常用的传统方药之一，全方由沙棘膏、木香、白葡萄干、甘草、栀子5味药组成, 沙棘膏为方中君药,含多种黄酮化合物,主要有异鼠李素、异鼠李素-3-β-D-葡萄糖苷、异鼠李素-3-β-D-芸香糖苷、槲皮素、山奈素。方中以味酸,性温,锐而有止咳、祛痰、除巴达干功效的沙棘膏为主;以排脓、祛痰的木香为辅,配以白葡萄干以清肺热、止咳、平喘,甘草以清热,止咳、祛痰,栀子以清血热为之佐使.功能主治清热祛痰,止咳定喘,临床用于肺热久咳,喘促痰多,胸中满闷等。现行2015年版《中国药典》一部收载有五味沙棘散,且其质量标准较为完善^[1]，市场上已有五味沙棘颗粒、五味沙棘含片及五味沙棘口服液等，但有关泡腾片质量标准的研究尚未见报道。鉴于此将其制成迅速溶解，吸收迅速，便于患者服用的口服泡腾片剂型。本试验采用水平正交试验法，以方中君药沙棘膏中槲皮素、山柰素、异鼠李素的总量作为提取工艺的评价指标，来优化五味沙棘泡腾片的较优提取工艺。

1 仪器与试药

岛津LC-20A型高效液相色谱仪（SPD-M20A二极管阵列检测器、CBM-20A型控制器、CTO-20A柱温箱、LC-20AT型输液泵、SIL-20A型自动进样器、LC solution色谱数据工作站、DGU-20A₅型脱气机)，电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司），旋转蒸发仪（瑞士步琦有限公司），HH-D4型数控恒温水浴锅（金坛市双捷实验仪器厂），甲醇、磷酸（天津市盛奥化学试剂有限公司）、乙醇（国药集团化学试剂有限公司），色谱甲醇（SIGMA-ALDRICH）,水为超纯水，槲皮素、山柰素、异鼠李素（中国食品药品检定研究院），中药材（内蒙古天力药业有限公司）

2 方法与结果

2.1 正交试验优选提取工艺条件

  由于处方中多数药材的已知有效成分在乙醇中具有较好的溶解性^[2,3,4,5,6]。故采用单因素考察后，选用L₉（3⁴）水平正交试验，以槲皮素、山柰素和异鼠李素含量对工艺进行优化，所确定的正交因素水平见表1

表1

2.2 槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量测定

2.2.1 色谱条件

   采用Agilent C₁₈ 色谱柱(250mmx4.6mm,5μm;流动相为甲醇：0.4%磷酸水溶液（65：35），流速1ml·min^-1，柱温35℃，检测波长370nm，进样10μl。

2.2.2供试品溶液

  取五味沙棘方中除木香外的其余四味药,精密称定, 置圆底烧瓶中, 精密加入8倍量的75% 乙醇, 加热回流l h,提取2次, 滤过放冷, 用旋转蒸馏仪回收乙醇后将药液定容于100ml容量瓶中备用。精密量取25 m L ,置具塞锥形瓶中, 加盐酸3.5 m L , 加热回流水解lh, 立即冷却, 移至50 m l 量瓶中, 用适量75 % 乙醇洗涤容器,洗液并人同一量瓶中,加75 % 乙醇至刻度,摇匀,滤过,即得。

2.2.3 对照品溶液的制备

  精密称取槲皮素3.559mg,山柰素2.534mg,异鼠李素5.021mg分别置于100ml，100ml，10ml容量瓶中用甲醇溶解并定容，摇匀，滤过，即得对照品溶液

2.2.4阴性对照试验

   阴性对照提取液(处方中缺沙棘膏药材),按提取物测定液的制备方法制备供试液,进样测定.结果表明其色谱在槲皮素山柰素异鼠李素相应保留时间无峰见图1,说明处方中其他成分对测定结果无干扰。

2.2.5线性关系考察

 精密吸取“2.2.3”节下混合对照品溶液1、2、5、10、15、20μL，注入高效液相色谱仪，按“2.2.1”节下色谱条件进行测定，以进样量对峰面积积分值进行回归分析，所得结果见表2，3种黄酮在所测定范围内呈良好的线性关系。

2.2.6精密度试验

  精密吸取标准品溶液10μl进样,按2.2.1项下重复进样6次,测得槲皮素、山柰素和异鼠李素的峰面积积分值,计算RSD分别为0.65%、0.74%、0.86%。表明方法精密度良好。

2.2.7稳定性试验

  取提取液测定液，按0、2、4、6、8h不同时间间隔进样，测得槲皮素、山柰素和异鼠李素的峰面积积分值，计算RSD分别为1.03%、1.15%、1.52%，结果表明提取物测定液中槲皮素、山柰素和异鼠李素在8h内稳定。

2.2.8重复性试验

  分别称取样品5份，按供试品溶液制备方法平行制备5份溶液，进样10μl，测定峰面积，连续进样2次，计算槲皮素、山柰素、异鼠李素含量的RSD分别为0.77%、0.57%、0.77%。结果表明，本方法重复性良好。

2.2.9 回收率试验

  精密称取已测知含量的五味沙棘提取物的样品,分别加入不同质量的槲皮素(见表3)山柰素（见表4）异鼠李素（见表5）对照品,按样品溶液的制备方法制备样品,测定其含量,计算回收率。

表3  槲皮素对照品

表4  山柰素对照品

表5  异鼠李素对照品

2.2.9提取物含量测定

  精密吸取正交试验各试验号提取液测定液10μl,按上述色谱条件依次进样,测定槲皮素、山柰素、异鼠李素峰面积积分值见图1,经计算槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量见表6

2.3 试验结果分析

  采用综合平衡法对试验结果进行极差分析和方差分析(SPSS统计软件),结果见表4。

  由表4中的R值可知，以槲皮素、山柰素、异鼠李素的总含量为指标时，影响因素的大小顺序均为A>C>D>B。说明溶剂浓度和提取时间是重要因素，提取次数和溶剂倍数次之。由方差分析结果可知，因素A、C对总含量的影响均有显著性。结合极差分析，并按生产实际中降低消耗，提高效率的原则，确定五味沙棘泡腾片较优的提取工艺条件为A₂B₃C₁D₂，即加入75%乙醇8倍量，提取2次，每次1h。

2.4 提取工艺的验证

   按上述较优的工艺进