不同煎煮时间对黑顺片煎煮液中生物碱组分变化的影响

张巍云*，杨东花^#，赵克宏，解承林，刘海兰，贾守宁

(青海省中医院，青海 西宁 810000）

摘要  目的：建立黑顺片煎煮液中生物碱的含量测定方法，考察不同煎煮时间对黑顺片生物碱含量的影响。方法：采用高效液相色谱法测定不同煎煮液中生物碱成分的含量。结果：煎煮后，双脂型生物碱的量消失；当黑顺片煎煮1.5小时，常规煎煮法与自动煎药机煎煮液中单脂型生物碱的总量均达到峰值。结论：黑顺片最佳煎煮时间为1.5小时。

关键词  黑顺片、高效液相色谱法、生物碱含量、煎煮时间

Effects of Different Decoction Conditions on the Alkaloid Content in the Frying Liquid of Aconiti Lateralis Radix Praeparata

Zhang Weiyun^*,Yang Donghua^#,Zhao Kehong,Xie Chenglin,Liu Hailan,Jia Shouning

(Qinghai Hospital of Traditional Chinese Medicine,Qinghai,Xining 810000,China.)

Abstract:Objective To establish a method for the determination of  Aconiti Lateralis Radix Praeparata in the decoction, the effects of different decocting conditions on the alkaloid content of the decoction were investigated.Methods: HPLC was used to determine the content of alkaloids in different decoctions.Results: After decocting, the amount of double fat alkaloids disappeared, and Aconiti Lateralis Radix Praeparata were decocted for 1.5 hours. The total amount of single fat alkaloids in the decoction of conventional decoction and automatic subtraction machine reached its peak.Conclusion: The best decocting time is 1.5 hours.

Key words：Aconiti Lateralis Radix Praeparata；hplc；general alkaloid；decoction time

黑顺片为有毒中药饮片，在临床使用中较为普遍，且每日用药剂量通常在10-30g，多超出《中国药典》用量范围，超剂量用药的安全性控制仅以延长煎煮时间来完成，通过长时间的煎煮，其毒性能否降低到安全范围，有效性是否被保留，尚无定性定量的考证，临床用药存在很大的安全隐患。为此，通过本项目研究，筛选出黑顺片的最佳煎煮工艺条件，为临床用药安全、有效提供依据。 

1仪器设备及试剂试药

1.1仪器设备

高效液相色谱仪（日本岛津公司，LC-20AT），电子分析天平（梅特勒-托利多，MS105），超纯水系统(Millipore，法国)，超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，BX53）。

1.2试剂试药

苯甲酰乌头原碱对照品(111794-201304)、苯甲酰次乌头原碱对照品(111796-201304)、苯甲酰新乌头原碱对照品(111795-201604)、乌头碱对照品（110720-201111）、次乌头碱对照品（110798-201609）、新乌头碱对照品（110799-201608）均购自于中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈、四氢呋喃为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；黑顺片购自青海九康中药饮片有限公司经鉴定为合格饮片。

1.3黑顺片煎煮液的制备

取黑顺片15g，加10倍量的水浸泡30min，武火煮沸，改用文火保持微沸1小时，趁热过滤，滤液配制成150ml，置4℃冰箱冷藏备用。

2方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃(25:15)为流动相A，以0.1mol/L醋酸铵溶液(每1000ml加冰醋酸0.5ml)为流动相B，进行等度洗脱，检测波长为235nm。理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于3000。

黑顺片水煎液

对照品溶液

1.苯甲酰新乌头原碱 2.苯甲酰乌头原碱 3.苯甲酰次乌头原碱

图1  黑顺片水煎液煎煮液HPLC色谱图

2.2 对照品溶液的制备

取苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品适量，精密称定，加异丙醇-二氯甲烷（1：1) 混合溶液制成每1ml含苯甲酰新乌头原碱对照品7.904ug、苯甲酰乌头原碱对照品8.368ug、苯甲酰次乌头原碱对照品8.208ug的混合溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取黑顺片煎煮液20ml，用二氯甲烷萃取3次，每次20ml，合并萃取液，40℃减压回收至干，加异丙醇-二氯甲烷（1:1）定容至3ml，滤过，取续滤液，既得。

2.4方法学考察

2.4.1线性关系考察

精密吸取混合对照品溶液2、4、6、8、10、12、14、16、18、20µL分别注入液相色谱仪中，按2.1项下色谱条件进行测定，以进样量X（µL）为横坐标，以峰面积Y（A）为纵坐标绘制标准曲线，结果见表1。

表1 线性关系考察结果

2.4.2精密度试验

精密吸取混合对照品溶液10µL，按2.1项下色谱条件重复进样6次，测定3种单脂型生物碱的峰面积，计算RSD。苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱峰面积的RSD分别为0.53%，0.51%，1.95%，表明仪器精密度良好。

2.4.3重复性试验

取黑顺片水提物样品6份，照2.3项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件，进样10ul阵进行测定，计算3种单脂型生物碱含量和含量的RSD。在6份样品中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱含量的RSD分别为0.24%，2.55%，1.82 %，表明该方法重复性良好。

2.4.4稳定性

取黑顺片水提物样品，照2.3项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24进样10ul测定，计算3种单脂型生物碱含量和含量的RSD。样品中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱含量的RSD分别为2.54%，1.86%，2.99%，说明3种单脂型生物碱在实验环境中24h内性质稳定。

2.4.5加样回收试验

取己知含量的黑顺片水提物样品6份，分别精确加入一定量苯甲酰新乌头原碱，苯甲酰乌头原碱，苯甲酰次乌头原碱对照品。按2.3项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件，分别进样测定3种单脂型生物碱的含量，计算平均回收率和RSD，取样量按干燥品计，结果见表2。苯甲酰新乌头原碱，苯甲酰乌头原碱，苯甲酰次乌头原碱在6份样品中回收率RSD分别为2.84%，1.86%，2.38%，各回收率在合理范围内，说明该方法可行。

表2  加样回收实验

2.5常规煎煮方法

    取附片约15g，置于1L圆底烧瓶中，加10倍量的水，浸泡30min，加热回流提取0、15、30、45、60、90、120min，趁热过滤，滤液置于冰箱内放置，备用。取药液20ml，按2.3项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件，分别进样测定3种单脂型生物碱的含量。结果见表3。

表3  不同煎煮时间下生物碱的溶出量

2.6自动煎药机煎煮

取附片约150g，置于自动煎药机中（煎药机压力为10MPa），加10倍量的水，浸泡30min，加热回流提取0、15、30、45、60、90、120min，用自动包装机包装。取药液20ml，按2.3项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件，分别进样测定3种单脂型生物碱的含量。结果见表4。

注：附片剂量为药典最高限量15g，运用煎药室十功能自动煎药机进行煎煮时，将煎煮温度控制在100℃，压力为10kpa进行试验考察。

表4  不同煎煮时间下生物碱的溶出量