动物疫病监测抽样技术

梁建波  刘枢清

（青岛市动物疫病预防控制中心，山东 青岛 266199）

摘要：动物疫病检测抽样原则，抽样方法，样品的保存、运输及注意事项。

关键词：抽样:保存：运输

动物疫病监测工作中的抽样，又称采样，是从群体中抽取一部分样本，根据对样本的检测来推断总体的情况的过程。抽样是动物疫病监测诊断工作的重要环节，采集样品的时机，样品的处理、保存运送等均影响到疫病监测与诊断结果的准确性和可靠性。

1抽样的基本原则

1.1抽样的效果，取决于样本对总体是否有充分的代表性。动物疫病监测一般采取随机抽样的方法，就是依据随机原则，按照设计好的抽样策略，从总体中抽取部分单元的方法。随机抽样时，尽可能确保每个抽样单元被抽到的概率相等且不为零 。随机抽样方法包括简单随机抽样，系统随机抽样和分层随机抽样。

    1.2简单随机抽样在抽样前，对目标总群中的所有单元进行编号，记录而形成的完整列表。抽样框可以是一份名单（名单抽样框）、一张地图（区域抽样框）或数据包，具有目录的性质。分层随机抽样首先将总群各个单元依据抽样的目的先分组，再在每一组内进行随机抽样的方法。这种方法规定了每一组提供样本的百分比，避免了小的组群代表性的不足，在总群构成复杂的情况下的比随机抽样更精确。 

2抽样技术

2.1器具 保温箱或保温瓶、酒精棉、碘酒棉、2-5ml注射器及针头。样品容器： 1.5mL 塑料离心管、易封口样品袋，塑料包装袋等。塑料盒（ 1.5mL 小塑料离心管专用）、封条,冰袋。不干胶标签、签字笔、记号笔、采样单、记录本等；口罩、一次性手套、乳胶手套、防护服、防护帽、胶靴等。

2.2抽样操作规范

    （1）饲养场内同一日龄饲养在一起的畜禽为一个群体，农户散养畜禽以自然村为一个群体。

    （2） 抽样时间和数量

      需检测的群体应在疫苗免疫后3周～4 周采样，每个群体应随机抽样。散养畜禽应采自5个以上农户。

(3) 鸡翅静脉采血 ：翅静脉采血，每只家禽采血样 1.5ml，盛于1.5ml 离心管中，等待血清析出。气温低时，在保温箱中放入热水袋，再将盛血样的离心管放入，以利于血清析出。析出血清后，将血清移到另外的塑料离心管中，封好口，贴好标签。不同禽只的血样不能混合。

(4) 棉拭子样品的采集

每只鸡采集泄殖腔拭子和喉气管拭子各 1 个，将样品端剪下分别置于2毫升离心管，离心管预装含10%甘油 的PBS ，封好口，贴好标签。泄殖腔拭子采集方法：将棉拭子插入泄殖腔约 1.5-2cm,旋转后沾上粪便。喉气管拭子采集方法：将棉拭子插入口腔至咽的后部直达喉气管，轻轻擦拭并慢慢旋转，沾上气管分泌物。

(5) 猪前腔静脉采血

选取合适的针筒和针头。针筒一般为5ml规格的一次性针筒。由于猪的大小不同，前腔静脉的深浅不一样，要求使用的针头是不一样的。公母猪宜选用16# 50mm针头；30kg以上的中大猪，宜选用12# 38mm针头；10-30kg小猪，可选用9# 25mm；10kg以下乳猪，应选择9# 20mm针头(一次性注射器所配的另一种规格的针头)。找准下针部位。猪的前腔静脉，越往头部越浅，但也越细；越靠胸部越粗，但越深。所以，采血应选择适当的部位。小猪取血的部位太靠前，血管太小，很难扎中，而且扎中了也很难抽到血液，所以，小猪的采血部位应稍靠后。中大猪和公母猪血管比较大，往后太深，针头够不到血管，所以，应略靠前。20kg以下的小猪应采两前肢与气管交汇处，公母猪和20kg以上中大猪可选颈部最低凹处。

(6) 牛尾静脉采血

左手抓住牛尾向上抬举，右手在尾部腹侧距肛门10-15cm处(即第4-5或5-6尾椎交界处)，用酒精棉球进行常规消毒后，持牛用一次性连试管采血器(也可用5ml的一次性塑料注射器)，在消毒处即尾腹侧中部凹陷处，垂直刺入1cm左右，待针头轻微触到尾骨时，再退回1mm左右，见有回血即可进行抽血

(7) 羊颈静脉采血

看清颈静脉后，采血者用左手拇指（或食指与中指）在采血部位稍下方压迫静脉血管，使之充盈、怒张。右手持采血针头，沿颈静脉沟与皮肤呈45°角，迅速刺入皮肤及血管内，如见回血，即证明已刺入；使针头后端靠近皮肤，以减小其间的角度，近似平行地将针头再伸入血管内1～2厘米。放开压迫脉管的左手，收集血液。采完后，以干棉球压迫局部并拔出针头，再以5%碘酊进行局部消毒。

2.3血液样品的分离方法

（1）抗凝血：采血前在试管或注射器内按比例加抗凝剂，抗凝剂一般选EDTA。运输时必须减少震荡以免溶血。

（2）非抗凝血：待血液凝固后，让血清自然析出。要想血清析出又多又好就要选择合适容器，玻璃试管优于塑料离心管；要摆成斜面，与空气接触面要大。要控制温度，最佳温度是体温，夏天避免日光下暴晒，冬天避免结冰；如果气温高于15℃时，可室温静置最短2小时，放入冷藏箱过夜，第二天用离心机以转速8000转离心1分钟。如果气温偏低，要在保温箱内放置50-60℃的暖水袋，室温静置2小时左右，放到37℃温箱1小时，再放入冷藏箱过夜，第二天离心分离血清。

3样品的保存和运输

3.1样品的保存

血清：4-8℃冷藏，不超过1周；抗凝血： 4-8℃冷藏，不超过1周；病毒检验材料：短时间可冷藏，否则须-20 ℃或-70 ℃以下保存，无条件的可置灭菌50%甘油-PBS液中冷藏，不宜反复冻融；细菌检验病料：冷藏，不宜冷冻，可置灭菌的30%甘油-PBS液/盐水中冷藏。

所有冻存样品忌反复冻融。

3.2样品的运输

（1）要选择符合要求的容器：容器要密封，不渗漏，以免造成环境污染或疫情扩散。

（2）样品应在低温下保存和运输（放置冰块）。拭子样品和组织样品应作暂时的冷藏或冷冻处理，然后运送。血清样品，若 24h内运达实验室，冷藏运输；若超过 24h，要先冷冻后，再冷藏运输，途中不能超过 48h。

（3）时间要求：样品若能在4h内送到实验室，可用冰袋冷藏运输。如果超过4h，应置于-30 ℃作冷冻处理，再在保温箱内加冰袋运输，在24h内送到。

4抽样时注意事项

4.1注意人畜共患病：做好自身防护，不直接接触动物样品。

4.2注意人为的传播疫病：采样工具和防护用品，随身带走，统一消毒。

4.3抽样时要调查动物的健康状况（饮食，免疫，用药等）

4.4采集的病料应当包装完好，防止污染环境，防止无意的传播疾病，做好环境消毒和病害肉的无害化处理。

参考文献

[1] 沈朝建，王幼明，兽医流行病学调查与监测[M].北京：中国农业出版社,2013.

[2] 刘红，等，实验室活动中生物安全问题的处置方法和个人防护[J].今日畜牧兽医,2010,07.