金黄色葡萄球菌蛋白A串联Z结构域的表达、纯化及其亲和填料制备

作者：毛积辉 单位：北京协和医学院继续教育学院 北京100730

【摘　要】
目的 构建金黄色葡萄球菌蛋白A（StaphylococcalProtein A,简称SPA或蛋白A）,串联Z结构域的重组表达克隆,并实现在大肠杆菌中诱导表达,随后纯化获得重组蛋白,制备亲和填料.方法 对目的基因进行元和表达的密码子优化,利用PCR扩增方法获得SPA的3个串联Z结构域,并在蛋白的N端加入组氨酸标签.将优化后的基因序列克隆到pET43.1a（＋）表达载体上,获得pET43.1a（＋）-SPA-3Z重组质粒;测序正确的重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）,IPTG诱导表达,通过亲和层析方法纯化表达的重组蛋白,并使用SDS-PAGE鉴定表达蛋白.将纯化获得的SPA纯品偶联到经环氧氯丙烷活化的Sepharose 6B Fast Flow 凝胶上.使用兔多抗和腹水单抗对填料进行验证.结果 成功构建pET43.1a（＋）-SPA-3Z克隆,纯化的SPA蛋白纯度高.成功将重组SPA偶联到经环氧氯丙烷活化的Sepharose 6B Fast Flow 凝胶上.制备的填料在0.1mol/L的NaOH溶液里浸泡30小时,填料亲和性能未见明显变化,这为填料的长期使用提供了可能.将该填料用于抗体纯化,湿胶的多抗结合量可达22.7mg/ml,纯化的腹水单抗纯度在98%以上.结论 本研究为SPA的大规模制备提供了基础.
【分　类】
期刊>自然科学与工程技术>基础科学>生物学
【关键词】
葡萄球菌蛋白a,原核表达,纯化,亲和填料制备,
【收　录】
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