贯筋藤对小鼠免疫活性的影响

刘威良，姬昱，皮渤淼，苏慧敏，吴白芬，黄艾祥

（云南农业大学食品科学技术学院，昆明 650201）

摘要：目的：贯筋藤是云南特色的药食同源植物，富含多种生物活性物质，具有很高的开发价值。方法：研究以贯筋藤及其料渣为原料，乙醇超声萃取的方法制备贯筋藤粗提物，采用小鼠碳粒廓清实验，测定廓清指数、吞噬指数、免疫器官（胸腺和脾脏）重量来探究贯筋藤提物对小鼠免疫调节作用的影响。结果：与空白组相比，贯筋藤醇提物均能明显提高正常小鼠脾脏指数、胸腺指数、巨噬细胞吞噬指数和廓清指数，且有统计学差异（p＜0.05）；与泼尼松组相比，贯筋藤提取物对免疫抑制小鼠免疫器官（胸腺和脾脏）指数、巨噬细胞的廓清指数和吞噬指数均有显著增强作用，且有统计学性差异（p＜0.05或p＜0.01）。结论：贯筋藤醇提物对小鼠免疫功能有一定的促进作用。

关键词：贯筋藤；贯筋藤料渣；小鼠；免疫调节活性；药食同源植物

Investigation on the Immune Activity of The Ethanol Extract of Dregea Sinensis Hemsl and its Residue on Mice

LIU Wei-liang,JI Yu, PI Bo-miao，SU Hui-min，WU Bai-fen，HUANG Ai-xiang

(College of Food Science and Technology; Yunnan Agricultural University，Kunming 650201）

Abstract: Object:Dregea sinensis Hemsl is a kind of medicinal and edible homologous plant in Yunnan folk, it have a variety of bioactive substances and high development value. Methods: In this experiment,making use Dregea Sinensis Hemsl and its dregs,Utilizng alcohol and ultrasonic to prepare the crude extraction, to observe the influence by determine the weight of immune organs index of the mice, swallow function and carbon clearance capacity of the mice’macrophage. Results: Compared with the control group, about the effect on the normal mice’s immunity organs weight of the Dregea Sinensis Hemsl ethanol extrat indicate that it can increase the spleen index of the mice significantly(p＜0.05), to the thymus index also have significant difference（p＜0.05）,it also can dramatically enthance swallow activity of the macrophage（p＜0.05）; Compared with the metacortandracin group ,the ethanol extrat of Dregea Sinensis Hemsl and its dregs have significant improved the immunity organ index, consuming index and expurgation index（p＜0.05 or p＜0.01）Conclusions:The ethanol extract of the Dregea Sinensis Hemsl has some effect on the immune function of mice.

Key words: Dregea sinensis Hemsl; Residual; Mice; Immunomodulation activity; Homologous medicinal plants

苦绳（Dregea sinensis）又称“小木通、奶浆藤、通关散”，属萝藦科南山藤属野生植物资源，广泛分布于中国内陆如四川、广西、贵州、云南等地区的山岭地带，现在还未见人工培育的种苗^[1]。它有一个变种名叫“贯筋藤”，以云南西北地区的澄江、丽江、大理和昆明等地的灌木丛或山林中居多^[2]。贯筋藤浑身是宝，其各个器官用热水蒸煮浸泡后的溶液，可用来制作云南大理一种特色小吃“乳扇”，其鲜叶、花蕾可与辣椒面、豆豉等风味调料一起搭配烹饪食之^{[3, 4]}。有医药专著记载贯筋藤可祛风湿止痛、平喘止咳、通经下乳，用以医治风湿痹痛、肺热咳喘、跌打损伤等病症^[5-7]。研究表明^[8-11]，贯筋藤富含黄酮、多糖、甾体皂苷及蛋白质等活性成分，其生理功效有抗抑郁、抗癫痫、抗糖尿病、神经保护、肝保护、免疫调节及抗癌等。

国外对贯筋藤研究较少，国内中科院昆明植物所致力于研究其活性物质的萃取、分离及结构鉴别等方面^{[12, 13]}。国内学者黄艾祥等研究发现^[14]，贯筋藤中的蛋白酶类物质是一种天然、高效及安全的凝乳剂，可用于食品加工，工业絮凝剂生产等。关于贯筋藤体内免疫调节作用的系统性研究未曾见报道，贯筋藤提酶后直接丢掉造成资源的不合理利用，本实验以贯筋藤及提酶后的料渣为研究材料，初步探讨其提取物对小鼠免疫活性的影响，为其资源在医疗保健领域的利用、开发提供科学依据，也为其料渣的高效、合理处置提供新的路径。

1 材料与仪器

1.1实验材料

贯筋藤鲜茎采自云南丽江永胜县，海拔1500～3500m灌木丛或山林中。

1.2 实验试剂

醋酸泼尼松（批号：20180518），浙江仙琚制药股份有限公司；印度墨水（批号：20180512），Solarbio生化试剂公司；羧甲基纤维素钠（批号：F20170909），国药集团化学试剂有限公司；无水乙醇（分析纯，批号：20180925），天津市风船化工股份有限公司；其他试剂均为国产分析纯。

1.3实验仪器与设备

Thermo1500全波长酶标仪（芬兰雷勃公司）；RE520旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；Scientz-500C多功能恒温超声萃取仪（宁波新芝生物科技股份有限公司）；CP153电子天平（奥豪斯仪器有限公司）；TDL-5-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；LC-162C海尔冰箱（青岛海尔集团）。

1.4 实验动物

SPF级昆明种小鼠，雄性，体重（18~22g），采购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，生产许可证为：SCXK（湘）2016-0002。

2 实验方法

2.1 样品的制备^{[15, 16]}

贯筋藤及料渣醇提物：称取1kg贯筋藤干茎，粉碎，加入70%乙醇，料液比为1:10，超声提取（功率600W，25℃，工作间歇比2s/2s）30min，用纱布过滤，旋转蒸发仪浓缩至无醇味，真空冷冻干燥备用；称取1kg贯筋藤干茎，洗涤敲断20倍水浸泡（60℃，30min）提酶后得料渣，放烘箱50℃烘干后同法制备料渣醇提物，临用时用0.5%羧甲基纤维素钠溶液配成悬浮液。

2.2 动物分组及剂量

按人用药生药量折算为小鼠灌胃剂量，将78只小鼠按体重随机分为6组，每组13只，即空白、泼尼松、贯筋藤醇提物、料渣醇提物、贯筋藤醇提物+泼尼松、料渣醇提物+泼尼松。各组均灌胃给药，给药组给予相应药物（生药量）5g/kg，泼尼松10mg/kg，空白和模型组给予同等剂量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液。小鼠连续灌胃14d后开始试验，给药期间观察各组小鼠精神状态、皮毛色泽、饮食与粪便有无异常。

2.3 小鼠免疫抑制模型的建立^[17]

参考文献方法并改进，采用醋酸泼尼松（10mg/kg）连续灌胃给药，致使小鼠免疫器官（胸腺和脾脏）萎缩，建立小鼠免疫抑制模型。

2.4 小鼠碳粒廓清实验^[18]

小鼠连续给药14d后，禁食不禁水，于末次给药后30min，立即尾静脉注射20%的印度墨汁（0.1mL/10g），分别于2min、12 min时眼眶取血20mL，立即溶于2mL且浓度为0.1%的 Na₂CO₃溶液中摇匀，置于波长为680nm处比色，测定其OD值，并计算廓清指数K值。计算公式为：K=（lgOD₂-lgOD₁₂）/（T₁₂-T₂），注：OD₂、OD₁₂为不同时间期取血样的光密度值,T₁₂-T₂为所取血样间隔的时间差。

2.5 小鼠吞噬指数及脏器指数的测定^[19]

小鼠取血完成后，脱颈椎处死取肝、脾脏及胸腺，用滤纸吸干其表面血渍，并精确称重，计算脾脏指数、胸腺指数与吞噬指数（a）。计算公式为：a=K^1/3*体重/（肝重+脾重）；胸腺指数=胸腺重量（mg）/体重（g），脾脏指数=脾脏重量（mg）/体重（g）。

2.6 统计学处理方法

所有数据均用SPSS18统计软件进行统计，所得数据以`x±S表示，组间比较采用t检验，p＜0.05表示组间差异有统计学意义。

3 结果与分析

3.1 贯筋藤醇提物对小鼠体重的影响

给药期间，各组小鼠毛色有光泽，活泼好动，状态较好，未出现不良反应。与初始体重相比，各组体重均有增长趋势，组间体重无统计学差异，结果见表1。

表1贯筋藤醇提物对小鼠体重的影响（`x±S）

3.2 贯筋藤醇提物对小鼠免疫器官重量的影响

本研究显示，连续灌胃给药14d后，贯筋藤及其料渣醇提物与空白组比较，明显增加小鼠的胸腺和脾脏指数，且有统计学差异（p＜0.05）；与泼尼松组比较，免疫抑制小鼠胸腺与脾脏指数均显著升高，且有统计学差异（p＜0.05或p＜0.01），结果见表2。

表2贯筋藤醇提物对小鼠免疫器官重量的影响（`x±S）

与空白组比较，^*p＜0.05,^**p＜0.01；与泼尼松组比较；^#p＜0.05，^##p＜0.01

3.3 贯筋藤醇提物对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响

本研究显示，连续灌胃给药14d后，贯筋藤及其料渣醇提物与空白组相比，均能提高小鼠巨噬细胞的吞噬指数，且有统计学差异（p＜0.05）；与泼尼松组比较，免疫抑制小鼠巨噬细胞的吞噬指数明显提高，且统计学意义（p＜0.05），结果见表3。

表3贯筋藤醇提物对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响（`x±S）

与空白组比较，^*p＜0.05,^**p＜0.01；与泼尼松组比较；^#p＜0.05，^##p＜0.01

3.4 贯筋藤醇提物对小鼠巨噬细胞廓清功能的影响

研究表明，连续灌胃给药14d后，贯筋藤及其料渣醇提物与空白组相比，均能提高小鼠巨噬细胞的廓清指数，且有统计学差异（p＜0.05）；与泼尼松组比较，免疫抑制小鼠巨噬细胞的吞噬指数明显提高，且有统计学意义（p＜0.05），结果见表4。

表4贯筋藤醇提物对小鼠巨噬细胞廓清功能的影响（`x±S）

与空白组比较，^*p＜0.05,^**p＜0.01；与泼尼松组比较；^#p＜0.05，^##p＜0.01

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